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菌种保藏及活化使用的注意事项

放大字体  缩小字体 发布日期:2018-05-27  浏览次数:648
菌种保藏的方法很多,但原理大同小异。首先要挑选优良纯种。利用微生物的孢子、芽孢及营养体;其次,根据其生理、生化性,人为创造低温、干燥或缺氧等条件,抑制微生物的代谢作用,使其生命活动降低到极低的程度或处于休眠状态,从而延长菌种生命以及使菌种保持原有的形状,防止变异。不管采用哪种保藏方法,在菌种保存过程中要求不死亡、不污染杂菌和不退化。

短期:斜面保藏

斜面保藏

斜面保藏是目前最普遍的短期保藏法,操作简单,使用方便,但需定期接种。因此工作量较大,而且传代次数多易发生变异,因此,仅适用于短期经常使用的菌种。

1. 配制培养基,营养成分浓度稍低为宜,特别是糖类尽可能降低,产酸菌种,则应添加少量碳酸钙;

2. 斜面装液量,斜面以倾斜后不超过试管长度 1/2 为宜;

3. 斜面培养,温度较最适稍低,时间较最适略长;

4. 生长完成后,密封置于 2~8℃的冰箱中保藏。每传代一次,霉菌、放线菌及有芽孢的细菌可保存 1~3 个月,酵母菌 2 个月,细菌1个月。

活化使用:

将斜面从冰箱中取出,细菌挑取菌落增菌,或霉菌切块传代培养,培养好即可使用。

长期:冷冻保藏

冷冻保藏

冷冻保藏是目前使用较为广泛的长期保藏法之一,适用于所各类微生物,较之于斜面保藏,减少了工作量,延长了保藏时间。

1. 准备斜面或平板新鲜培养物一个,10%的无菌甘油溶液;

2. 用甘油溶液将菌体或孢子洗脱下来,形成菌悬液;

3. 菌悬液分装,冻存管装液 1mL/支,后置于程序降温盒;

4. 将程序降温盒置于-80℃冰箱冻存;

5. 可保藏 1-2 年。

活化使用:

1. 将冻存菌株置于冻存盒中取出,准备水浴溶解,切勿常温融化;

2. 将菌株迅速置于水浴速溶,细菌 40℃,真菌 30℃,约 2min 全部溶解后接种到适宜培养基;

3. 采用适宜条件培养完成即可。 
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